丹参中丹参酮IIA和丹酚酸B含量采用不同提取法测定的影响。方法:分别采用加热回流提取、超声波提取和组织破碎提取3种提取工艺，对丹参中丹参酮IIA(脂溶性成分)和丹酚酸B(水溶性成分)进行提取，并利用RP- HPLC祛对二者进行测定。色谱条件:用YMCC18 (250mmX 4. 6mm,5um) 色谱柱，以甲醇一0. 5%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 mL min-1，检测波长为270nm(丹参酮IIA)和286nm丹酚酸B)。结果:丹参酮IIA和丹酚酸B浓度分别在0. 002 -0. 032mg.ml-1(r=0.9992和0. 015--0. 24 mg.ml-1(r= 0. 9997)范围内线性关系良好，组织破碎提取法比加热回流提取法、超声波提取法提取得到的丹参酮IIA和丹酚酸B含量高，而且节时节能。结论:本法准确、方便、灵敏，稳定性好，可作为丹参质量研究手段;同时表明组织破碎提取法明显优于加热回流提取法、超声波提取法，高效经济，是一种值得推广的高新提取工艺。

　　丹参为唇形科鼠尾草植物Salvia miltiorrhizabge的干燥根及根茎，为常用的活血化瘀药。始载于《神农本草经》，列为上品。其性微寒，味苦，无毒。有活血通经，凉血消肿，除烦清心之功效。临床上广泛用于治疗心血管疾病、肾病、肝病等，丹参的活性成分可分为水溶性成分和脂溶性成分两大类，脂溶性成分包括丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮等，水溶性成分包括丹酚酸B迷迭香酸、丹参素、原儿茶醛等。其中丹参酮IIA提丹参中脂溶性化合物的代表成分，丹酚酸B是其水溶性化合物的代表成分。

　　本实验采用加热回流提取、超声波提取和组织破碎提取3种方法提取丹参中丹参酮和丹参酚酸B并采用HPLC祛对二者进行了测定。结果表明不同的提取方法对丹参中丹参酮IIA和丹酚酸B含量测定的影响较大。本法准确、方便、灵敏，稳定性好，可用于丹参及其产品的质量评价;组织破碎法提取效率明显优于加热回流和超声波2种提取法，而且大幅度地节能节时节约溶剂，为对其进一步的研究和推广应用提供了科学依据。

　　1仪器与试药

　　HPLC系统:紫外检测器;四元泵;色谱工作站;分析天平;超声波清洗机中药粉碎机,闪式提取器,电热套,旋转蒸发仪

　　对照品丹参酮IIA及丹酚酸B均购自中国药品生物制品检定所;丹参采自河南省方城县，由郑州大学刘若庸教授和潘成学副教授鉴定为唇形科鼠尾草植物的干燥根及根茎;甲醇为色谱纯，水为超纯水，95%乙醇、甲酸为分析纯。

　　2方法与结果

　　2. 1色谱条件采用YMCC18(250mmX4.6mm,5um)色谱柱，柱温25℃;以甲醇(A)--0.5%甲酸水溶液(B}流动相，进行梯度洗脱[0一30min, A--B(35 65) 30一35 min,A--B (35:65)--A--B(80:20);35一50min,A--B(80:20)]，流速1. 0 mI. min-1;检测波长:丹酚酸B为286nm(0 ~30 min)丹参酮IIA为270um(30 ~50 min)进样量20ul

　　2. 2对照品储备液的配制精密称取对照品丹参酮IIA5mg,置25ml粽色量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得丹参酮IIA对照储备液;精密称取丹酚酸B5mg置10ml粽色量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得丹参酚酸B对照品储备液。

　　2. 3供试品溶液的配制

　　2. 3. 1加热回流提取法 取干燥粉碎过6号筛的丹参粉末50g精密称定，置圆底烧瓶中，浸泡20min加热回流提取3次(电热套加热，温度设定为65℃):每次精密加入75%乙醇400 ml,-提取时间分别为45, 40, 40 min静置10min过滤，合并3次滤液，浓缩，即得浸膏，精密称定。精密称取浸膏50mg置50ml粽色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，以微孔滤膜(0. 45 um)滤过，备用。同法制备3批样品的供试品溶液。

　　2. 3. 2超声波提取法 取干燥粉碎过6号筛的丹参粉末50g精密称定，置具塞锥形瓶中，浸泡20min利用超声波清洗机超声波室温提取3次:每次精密加入75%乙醇400 m1,-提取时间分别为30,25, 20 min静置10 min过滤，合并3次滤液，浓缩，即得浸膏，精密称定。精密称取浸膏50mg置50 ml粽色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，以微孔滤膜(0.45um)滤 过，备用。同法制备3批样品的供试品溶液。

　　2. 3. 3组织破碎法 取丹参药材50g精密称定，浸泡20 min利用“闪式提取器”破碎室温提取3次:每次分别精密加入75%乙醇350、 300、300 mL-提取时间分别为3、2、2min,静置10 min过滤。合并3次滤液，浓缩，即得浸膏，精密称定。精密称取浸膏50mg置50ml粽色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，以微孔滤膜(0. 45 um)滤过，备用，同法制备3批样品的供试品溶液。

　　2. 4线性关系

　　2. 4. 1丹参酮IIA精密量取丹参酮IIA对照品储备液0. 5, 1.0 2.0 4.0 8.0ml,分别置于50ml棕

　　色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。在“2. 1”项色谱条件下进样测定。以丹参酮IIA峰面积为纵坐标，进样浓度(mg.ml-1)为横坐标，计算回归方程为:Y=121.3 X26. 60 r=0. 9992丹参酮IIA浓度在0. 002 ~ 0. 032 mg. ml-1范围内，线性关系良好。

　　2. 4. 2丹酚酸B精密量取丹参酚酸B对照品储备液0. 15、0. 3、0.6 、1.2、2. 4 mL,分别置于5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。在“2. 1”项色谱条件下进样测定。以丹参酚酸B的峰面积为纵坐标，进样浓度(mg.mL-1)为横坐标，计算回归方程为:Y=27.09X-218.4 r=0.9997丹参酚酸B浓度在0. 015 ~0. 24mg.mL-1范围内，线性关系良好。

　　2. 5精密度试验 取上述超声波提取法制得的供试品溶液重复测定6次，测得丹参酮IIA峰面积的RSD为1.3%，丹参酚酸B峰面积的RSD为1.7%

　　2. 6重复性试验按照“2.3.1", "2.3.2", "2.3.3"项下方法，同一批药材分别平行制备5份供试品溶液，进行测定。结果采用加热回流提取法、超声波提取法及组织破碎法测得的丹参酮IIA平均含量(n=5)分别为0. 229%，0. 251% , 0. 314%，RSD分别为1.6%，1.4%，2.7%;丹参酚酸B平均含量(n=5为分别为1. 81% o, 1. 55%, 2.46%，RSD分别为1.2%，0. 73%, 1.9%。表明方法重复性良好。

　　2. 7 稳定性试验 将加热回流、超声、组织破碎3种提取方法制得的供试品溶液，每隔2h分别测定1次，结果丹参酮IIA峰面积的RSD分别为2.0%，1.2%，2.0%;;丹参酚酸B峰面积的RSD分别为0.9%，1.5%，1.2%。表明供试品溶液在12h内稳定。

　　2. 8回收率试验 采用标准加入法，加热回流提取法、超声波提取法及组织破碎法测得的丹参酮IIA的平均回收率(n=5)分别为97.11% ，96.30%，95. 90% ，RSD分别为2. 4%，1.4%，2.5% ;丹酚酸B的平均回收率(n=5)分别为98. 07%， 98.41%，97.85%，RSD分别为1. 70%, 0. 49%，1. 9%

　　2. 9 测定结果 取不同提取方法丹参的供试品溶液，在“2. 1”项色谱条件下进样测定，用外标法计算。不同提取工艺比较及含量测定结果见表1,色谱图见图1。

　　表1 不同提取方法提取中丹参酮IIA和丹酚酸B工艺研究与含量测定结果

　　图1 丹参酮IIA和丹酚酸B含量测定色谱图

　　A加热回流提取法、B超声波提取法、C组织破碎提取法、D丹参酮IIA对照品、E丹酚酸

　　B对照品1.丹参酮IIA 2.丹酚酸

　　3讨论

　　3. 1提取工艺研究

　　中药提取新工艺与新设备的开发研究，是中药现代化的前提和拟待解决的关键技术之一，然而我们至今无论在实验室还是在生产中，仍然多用的是一些传统提取工艺与设备，如水煎煮提取法、回流提取法等，这些传统提取工艺均存在着耗能、费时、提取效率低、破坏有效成分等不足，中药提取新工艺研究的严重滞后影响了中药现代化的进程。

　　本实验利用加热回流提取法、超声波提取法和组织破碎提取法提取丹参中丹参酮和丹参酚酸并测定含量，结果表明不同的提取方法对丹参中丹参酮IIA和丹酚酸B含量测定的影响较大。“闪式提取器”是运用组织破碎提取原理设计的中药提取新设备，试验结果也同时表明组织破碎提取法较其他2种提取方法有着突出的优越性:提取效率高(丹参酮IIA和丹参酚酸B含量均高出其他2种方法)而且大幅度地节约了能量、时间和溶剂，是一种值得推广应用的高科技提取新工艺。

　　3. 2提取溶剂的选择为有效地将丹参中脂溶性和水溶性成分同时提取出来，使工艺更加简单经济，经过文献查阅和前期试验研究，利用75%乙醇作为溶剂，经过3次提取，能较好地完成2种不同极性成分的同时提取，并且75%乙醇溶剂较之其他溶剂具有低毒、经济的优势。并根据文献资料研究和前期试验研究，本文确定了回流提取、超声波提取的最佳时间。

　　3. 3流动相的选择 曾对不同比例流动相系统(甲醇-水，甲醇一乙腈一甲酸一水，甲醇-0. 5%

　　甲酸水)等进行探索研究，结果表明以甲醇-0. 50%甲酸水的分离度、保留时间较为理想，能使丹参酮IIA和丹参酚酸B与其他成分达到基线分离，该方法稳定方便，可以用于丹参药材及其产品的质量评价方法中。